Um Experimente durchzuführen, ist die Zellausbreitung eine übliche Methode. Viele Menschen sind jedoch nicht sehr erfolgreich und die Verteilung ist ungleichmäßig: entweder dicht in der Mitte und spärlich herum oder dicht und kahl in der Mitte. Das Folgende ist die Verwendung einer 96-Well-Platte, um die Zellen gleichmäßig zu verteilen. Ich hoffe, es wird für alle nützlich sein!
Methode/Schritt
1. Im Allgemeinen werden 100 Mikroliter Zellsuspension in jedes Well einer 96-Well-Platte gegeben. Fügen Sie die Zellsuspension von der linken Seite der Vertiefung in der Nähe des Bodens hinzu. Nachdem Sie die Hälfte der Platte hinzugefügt haben, mischen Sie die Zellsuspension, fügen Sie sie nicht hinzu, fügen Sie die restliche Hälfte der Platte hinzu. Nachdem Sie alle Bretter hinzugefügt haben, decken Sie das Brett ab, halten Sie die linke Seite des Bretts vorsichtig mit der linken Hand und klopfen Sie mit der rechten Hand sanft auf die rechte Kante des Bretts, achten Sie auf den Griff (ich tippe normalerweise dreimal). Wenn es zu stark oder zu oft ist, werden die Zellen konzentriert und angesammelt. Drehen Sie die Platte im Uhrzeigersinn (gegen den Uhrzeigersinn ist nicht gut), klopfen Sie nacheinander auf die verbleibenden drei Seiten, lassen Sie sie etwa 5 Minuten stehen und legen Sie sie in einen 37-Grad-Inkubator.
Bei 6-Well-Platten, 12-Well-Platten oder 24-Well-Platten gebe ich eine kleine Menge serumfreies Medium in das erste Well, schüttle und dringe bis zum Boden des gesamten Wells ein und sauge dann mit einer Pipettenpistole ab den Boden des gesamten Brunnens zum ersten Brunnen. In zwei Löchern. Verwenden Sie die gleiche Methode, um bis zum Boden des Wells vorzudringen, während Sie andere Wells simulieren, so dass der gesamte Boden des Wells nass ist und die Zellsuspension flach auf dem Boden des Wells liegt. Beim Hinzufügen der Zellsuspension kann vermieden werden, dass mehr Zellen in der Mitte hinzugefügt werden und weniger Zellen in der Mitte hinzugefügt werden, und die Zellen werden gleichmäßiger verteilt. Beachten Sie, dass die Zellsuspension nach der Zugabe der Zellsuspension auf der Werkbank stehen bleiben sollte. Diese Methode ist etwas langsam, aber nicht langsam, wenn Sie geübt sind. Es kann auch aufgetragen werden, aber die Festigkeit ist nicht so gut wie bei der 96-Well-Platte und die Wirkung ist nicht so gut wie bei der 96-Well-Platte, daher habe ich die Methode des Durchdringens des Bodens der Wells aufgegeben.
2. Nach Zugabe der Zellsuspension die Zellkulturplatte anheben und das Licht von unten nach oben beobachten, um zu sehen, ob die Zellen aggregiert sind. Tippen Sie dann von unten, um es zu verteilen.
3. Befindet sich im Labor ein Flachschwinger, empfiehlt es sich, dieses Gerät zu verwenden, um leicht zu schwingen. Der Effekt ist gut, dh die Amplitude ist klein und die Frequenz hoch.
4. Die Zellen sollten so weit wie möglich verteilt sein, und die meisten Zellen befinden sich in einem einzigen Zustand. Nach dem Zentrifugieren ist es vollständig suspendiert! Etwas Übertragung auf die Sechs-Well-Platte zittert! Beim Schütteln'die Zellflüssigkeit nicht drehen lassen, sonst werden die Zellen alle in die Mitte gebracht und ungleichmäßig!
5. Wenn eine Flasche Zellen voll ist, fahren Sie mit der normalen Verarbeitung fort. Blasen Sie es gleichmäßig in den Kulturkolben und verteilen Sie dann eine 6-Well-Platte mit 2 ml pro Well. Wischen Sie es nach dem Verschmieren unbeobachtet mit Alkoholwatte ab und legen Sie es dann in den Inkubator. Etwas drei Runden nach links, drei Runden nach rechts, erst drei Runden, dann drei Runden. Grundsätzlich sind die Zellen in jedem Well nach 24 Stunden sehr einheitlich.
6. Berechnen Sie die gesamte benötigte Flüssigkeit und die Anzahl der Zellen, mischen Sie sie gleichmäßig und geben Sie sie in die Sechs-Well-Platte. Die Sechs-Loch-Platte schwankt horizontal in einer Acht. Unter dem Mikroskop beobachten. Wenn es nicht gleichmäßig ist, wie oben beschrieben erneut schütteln. Wenn die Zellen nicht gezählt und direkt eingepflanzt werden, schütteln Sie die Mischflasche jederzeit während des Einpflanzens der Sechs-Well-Platte. Normalerweise drehe ich die Flasche im oder gegen den Uhrzeigersinn.
7. Bewegen Sie sich zuerst nach oben und unten, dann nach links und rechts auf der horizontalen Platte, 5-6 Mal in jede Richtung, aber der Schlüssel ist, sie nach dem Schütteln direkt in den Inkubator zu legen, nicht' viel Bewegung, wie zum Beispiel in den Spiegel schauen, sonst wird es leicht, wieder in der Mitte zu sein.